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首頁-新聞資訊-入門分光光度計(jì)從使用步驟開始

入門分光光度計(jì)從使用步驟開始

  • 更新時(shí)間2021-08-30
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   分光光度計(jì)是用不連續(xù)的波長采樣反射物體或透射物體的一種測量儀器。由于不同物體分子的結(jié)構(gòu)不同,對不同波長光線的吸收能力也不同,因此,每種物體都具有特定的吸收光譜。能從含有各種波長的混合光中,將每一種單色光分離出來,并測量其強(qiáng)度的儀器叫做分光光度計(jì)。
  在使用過程中,由于機(jī)械振動、溫度變化、燈絲變形、燈座松動或更換燈泡等原因,經(jīng)常會出現(xiàn)刻度盤上的讀數(shù)與實(shí)際通過溶液的波長不符合的現(xiàn)象,因而導(dǎo)致儀器靈明度降低,影響測定結(jié)果的精度,需要進(jìn)行檢驗(yàn)。
  檢驗(yàn)波長準(zhǔn)確度方法是用干涉濾光片或鐠釹濾光片測量儀器的吸收峰值, 如果測出的值與濾光片標(biāo)準(zhǔn)值之差超出規(guī)程規(guī)定, 則需要進(jìn)行波長調(diào)節(jié)。
  使用分光光度計(jì)的步驟與方法:
  預(yù)熱儀器:
  為使測定穩(wěn)定,將電源開關(guān)打開,使儀器預(yù)熱20min,為了防止光電管疲勞,不要連續(xù)光照。預(yù)熱儀器時(shí)和在不測定時(shí)應(yīng)將比色皿暗箱蓋打開,使光路切斷。
  選定波長:
  根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求,轉(zhuǎn)動波長調(diào)節(jié)器,使指針指示所需要的單色光波長。
  固定靈敏度檔:
  根據(jù)有色溶液對光的吸收情況,為使吸光度讀數(shù)為0.2~0.7,選擇合適的靈敏度。為此,旋動靈敏度檔,使其固定于某一檔,在實(shí)驗(yàn)過程中不再變動。一般測量固定在“1”檔。
  調(diào)節(jié)“0”點(diǎn):
  輕輕旋動調(diào)“0”電位器,使讀數(shù)表頭指針恰好位于透光度為“0”處(此時(shí),比色皿暗箱蓋是打開的,光路被切斷,光電管不受光照)。
  調(diào)節(jié)T=100%:
  將盛蒸餾水(或空白溶液或純?nèi)軇?的比色皿放入比色皿座架中的第一格內(nèi),有色溶液放在其它格內(nèi),把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上,轉(zhuǎn)動光量調(diào)節(jié)器,使透光度T=100%,即,表頭指針恰好指在T=100%處。
  光具有與其波長成反比的一定量的能量。因此,較短波長的光攜帶更多的能量,而較長波長的光攜帶較少的能量。需要特定量的能量來將物質(zhì)中的電子提升到更高的能量狀態(tài),我們可以將其檢測為吸收。物質(zhì)中不同鍵合環(huán)境中的電子需要不同的特定能量來將電子提升到更高的能量狀態(tài)。這就是為什么在不同物質(zhì)中對不同波長會發(fā)生光吸收的原因。人類能夠看到一系列可見光,從大約380nm(我們看到的紫色)到780nm(我們看到的紅色)。紫外光的波長比可見光短,約為100nm。因此,光可以通過其波長來描述,這在UV-Vis光譜中可用于通過定位與最大吸光度相對應(yīng)的特定波長來分析或識別不同的物質(zhì)(參見下文中UV-Vis光譜的應(yīng)用部分)。
  分光光度法是比色法的發(fā)展。比色法只限于在可見光區(qū),分光光度法則可以擴(kuò)展到紫外光區(qū)和紅外光區(qū)。分光光度法則要求近于真正單色光,其光譜帶寬最大不超過3-5nm,在紫外區(qū)可到1nm以下,來自棱鏡或光柵,具有較高的精度。